寨卡病毒实验室检测技术方案

寨卡病毒(Zika Virus)属黄病毒科（Flaviviridae）黄病毒属Flavivirus），呈球形，直径约为40-70nm，有包膜。基因组为单股正链RNA，长度约为10.8Kb，可分为亚洲型和非洲型两个基因型。

寨卡病毒病的检测方法包括病毒核酸检测、IgM抗体检测、中和抗体检测和病毒分离等。寨卡病毒与黄病毒属其他病毒具有较强的血清学交叉反应，目前主要采用病毒核酸检测。

一、检测对象 

（一）疑似和临床诊断病例。

（二）伊蚊成蚊和幼虫。

二、样本采集、保存和运输 

（一）病例标本采集

对怀疑感染寨卡病毒的患者，要尽早采集血标本，同时要采集尿液和唾液标本。如果临床高度怀疑男性为寨卡病毒病，在上述标本无法确诊时，可考虑采集精液开展检测。

血液标本采集办法：用无菌真空干燥管，采集患者非抗凝血5 ml，及时分离血清，分装2管，保存于带螺旋盖、内有垫圈的冻存管内，标记清楚后低温保存，其中1管用于现场实验室检测，1管用于上级疾病预防控制机构复核。对病例应尽可能采集双份血液标本，两份标本之间相隔14天为宜，住院病例可于入院当天和出院前1天各采集一份。

尿液标本的采集方法:采集尿液标本10ml，置于无菌50ml塑料尖底离心管中，2000rpm离心5min去沉淀，将上清液分装至无菌15ml离心管中，每份5 ml。如需采集精液标本，应在采集精液标本前采集尿液标本。

唾液标本的采集方法:将唾液吐入50ml塑料尖底离心管中，4000rpm离心15min去沉淀，将离心后上清液分装，分装2管，每份1 ml，保存于带螺旋盖、内有垫圈的冻存管内后保存。

采集精液开展实验室检测时，需采集标本1～2 ml，置于无菌干燥、带螺旋盖、内有垫圈的冻存管内后保存。

（二）蚊媒标本采集

疫点内采集的伊蚊成蚊及幼虫，分类鉴定后，填写媒介标本采集信息表，按照采集地点分装，每管10～20只。

（三）标本保存、运送

如标本能够在24小时内开展实验室检测，应将标本置于2～8℃保存；不能及时检测的标本应尽快置于-70℃以下保存。

标本运送时采用低温冷藏运输，避免冻融，样本运输应遵守国家相关生物安全规定。

三、检测方法 

寨卡病毒病的检测方法包括病毒核酸检测、IgM抗体检测、中和抗体检测和病毒分离等。寨卡病毒与黄病毒属其他病毒具有较强的血清学交叉反应，目前主要采用病毒核酸检测。

开展蚊媒寨卡病毒检测时，主要对捕获的伊蚊成蚊或幼虫进行病毒核酸检测和病毒分离。

开展寨卡病毒实验室检测时，应同时考虑登革病毒和基孔肯雅病毒感染可能。登革病毒和基孔肯雅病毒实验室检测应按照相应的技术指南开展。

（一）临床标本检测

1．病原学检测

病原学检测主要适用于急性期血液标本，一般认为发病7天内检测阳性率高。

（1）核酸检测：采用荧光定量RT-PCR方法，是目前早期诊断寨卡病毒病的主要检测手段。可采用中国疾病预防控制中心病毒病所发放的荧光定量PCR试剂或其他商品化试剂盒进行检测。

（2）病毒分离：将标本接种于蚊源细胞（C6/36）或哺乳动物细胞（BHK21、Vero）进行分离培养，出现病变或5～7天以后，用检测核酸的方法鉴定病毒。也可使用乳鼠脑内接种进行病毒分离。

2．血清学检测

（1）血清特异性IgM抗体：发病3天后可检出病毒特异性IgM抗体，但发病7天后检出率高。可采用ELISA、免疫荧光等方法检测。IgM抗体阳性，提示患者可能新近感染寨卡病毒，但寨卡病毒IgM抗体与登革病毒、黄热病毒和西尼罗病毒等黄病毒有较强的交叉反应，易于产生假阳性。

（2）中和抗体：采用空斑减少中和试验方法检测。患者恢复期血清中和抗体阳转或滴度较急性期呈4倍及以上升高，且排除登革、乙脑等其他常见黄病毒感染，可以确诊。

3．其他标本检测

尿液、唾液和精液标本的检测可用血清病毒RNA提取试剂盒及核酸特异性检测试剂进行检测，结果判定同血清标本。

（二）媒介标本检测

1．标本处理

将分类后的伊蚊成蚊或幼虫，按照采集地点，每10～20只为一份进行研磨处理。

2．病毒核酸检测

用RT-PCR的方法进行寨卡病毒核酸检测。

3．病毒分离

病毒核酸阳性的标本进行病毒分离。

四、生物安全 

寨卡病毒按照第三类病原微生物进行管理。凡涉及寨卡病毒的分离、培养、未经培养的感染材料等的操作应在生物安全二级（BSL-2）实验室进行；灭活材料和无感染性材料的操作可在生物安全一级（BSL-1）实验室进行。病毒培养物的运输应满足国际民用航空组织公布的《危险物品安全航空运输技术细则》（Doc9284号文件）A类感染性物资的包装要求，对应的联合国编号为UN2814;未经培养的感染性材料（包括患者血、尿液、唾液或动物体液标本以及现场采集的媒介生物标本等）运输时应满足B类感染性物质的包装要求，对应的联合国编号为UN3373。开展相关运输活动须按照原卫生部发布的第45号令《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》进行审批后，方可实施运输。